在毛細(xì)管電泳（CE）與 PCR 結(jié)合的實(shí)驗(yàn)中，PCR 進(jìn)樣管（PCR VIALS）的選擇需兼顧 PCR 反應(yīng)兼容性和 CE 進(jìn)樣要求。以下是關(guān)鍵技術(shù)細(xì)節(jié)和建議：
設(shè)備支持情況
部分毛細(xì)管電泳系統(tǒng)（如 AB SCIEX P/ACE MDQ Plus、LUMEX Capel 205）明確支持直接使用標(biāo)準(zhǔn) PCR 管進(jìn)樣。例如，AB SCIEX MDQ Plus 的進(jìn)樣系統(tǒng)可容納 2×48 個(gè) 0.5mL 或 1.5mL PCR 管327，而 LUMEX Capel 205 支持 Eppendorf 標(biāo)準(zhǔn)離心管1829。用戶需根據(jù)設(shè)備說明書確認(rèn)具體兼容性。
進(jìn)樣方式適配
電動(dòng)進(jìn)樣：適用于荷電樣品，需注意樣品離子強(qiáng)度與緩沖液匹配，避免電歧視411。
壓力進(jìn)樣：通過正壓或負(fù)壓驅(qū)動(dòng)，需確保 PCR 管密封性良好，防止漏液1128。
真空進(jìn)樣：部分設(shè)備（如 MCE920）支持直接吸入 PCR 管內(nèi)的樣品，無需轉(zhuǎn)移30。
材質(zhì)選擇
低吸附特性：推薦使用 Eppendorf DNA LoBind 或 Protein LoBind 系列 PCR 管，其特殊材質(zhì)可減少 DNA 或蛋白質(zhì)吸附，提高樣品回收率2526。例如，Eppendorf 0030108418（1.5mL）和 30108116（1.5mL）型號(hào)通過 PCR 潔凈級(jí)認(rèn)證，無 DNase/RNase 污染25。
耐高溫性：需耐受 PCR 循環(huán)的高溫（如 95℃變性），建議選擇聚丙烯（PP）材質(zhì)，避免變形或破裂。
規(guī)格匹配
熒光檢測(cè)兼容性
若涉及熒光標(biāo)記（如多重 PCR 片段分析），需選擇透明且無熒光背景的 PCR 管，避免干擾檢測(cè)信號(hào)32。
PCR 產(chǎn)物處理
純化步驟：常規(guī)流程需對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行純化（如磁珠法或柱純化），以去除引物二聚體和鹽離子，避免堵塞毛細(xì)管或影響分離效果1213。例如，轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)中，純化后的 PCR 產(chǎn)物在毛細(xì)管電泳中峰型更清晰13。
直接進(jìn)樣條件：若設(shè)備支持未純化產(chǎn)物進(jìn)樣（如 MCE920），需確保樣品離子強(qiáng)度低于緩沖液，必要時(shí)稀釋后再進(jìn)樣30。
進(jìn)樣參數(shù)控制
病原微生物檢測(cè)
在多重 PCR 結(jié)合毛細(xì)管電泳的應(yīng)用中（如呼吸道病原體檢測(cè)），PCR 產(chǎn)物直接通過標(biāo)準(zhǔn) 0.2mL PCR 管進(jìn)樣，無需額外適配器。例如，南京醫(yī)科大學(xué)的研究中，7 種病原體的 PCR 產(chǎn)物經(jīng)毛細(xì)管電泳分離，特異性峰型清晰23。
基因分型與個(gè)體識(shí)別
牛親緣關(guān)系鑒定中，使用熒光標(biāo)記引物進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，產(chǎn)物通過 AB SCIEX 3500xl 平臺(tái)的毛細(xì)管電泳分析，兼容市售 0.2mL PCR 管24。
設(shè)備維護(hù)
定期清洗進(jìn)樣針和毛細(xì)管，防止交叉污染。例如，采用三通閥設(shè)計(jì)的上樣裝置可在進(jìn)樣前后自動(dòng)清洗管路1。
穩(wěn)定性驗(yàn)證
新批次 PCR 管需驗(yàn)證批次間一致性，包括吸附性、密封性和熱穩(wěn)定性。例如，Eppendorf 的 PCR 管提供批次驗(yàn)證報(bào)告，確保實(shí)驗(yàn)重復(fù)性25。
成本考量
低吸附 PCR 管成本較高，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇。例如，常規(guī) PCR 反應(yīng)可使用普通管，而微量或珍貴樣品建議使用低吸附管。
選擇兼容的 PCR 管需綜合考慮設(shè)備支持、材質(zhì)特性和實(shí)驗(yàn)流程。Eppendorf 等品牌的低吸附 PCR 管（如 DNA LoBind 系列）是理想選擇，而 AB SCIEX、LUMEX 等設(shè)備對(duì)標(biāo)準(zhǔn) PCR 管的支持簡(jiǎn)化了操作流程。通過優(yōu)化純化步驟和進(jìn)樣參數(shù)，可實(shí)現(xiàn)從 PCR 到毛細(xì)管電泳的高效銜接，適用于基因檢測(cè)、病原分析等多領(lǐng)域應(yīng)用。
產(chǎn)品型號(hào)：MH-A15226
32 篇資料
掃一掃，關(guān)注微信